Biotinyl-MCH (human, mouse, rat);Bio-DFDMLRCMLGRVYRPCWQV
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一、基础信息
- 中文全称:N 端生物素修饰人 / 小鼠 / 大鼠黑色素浓缩激素 MCH
- 英文全称:Biotinyl-MCH (human, mouse, rat)
- 三字母序列:Biotin-Asp-Phe-Asp-Met-Leu-Arg-Cys-Met-Leu-Gly-Arg-Val-Tyr-Arg-Pro-Cys-Trp-Gln-Val
- 单字母序列:Bio-DFDMLRCMLGRVYRPCWQV
- 氨基酸总数:19 aa
- 分子式:C105H162N30O26S4
- 分子量:2388.88
- 结构修饰说明:
- N 端共价修饰生物素(Biotin / Bio);
- 环化修饰:Cys8 与 Cys17 形成分子内二硫键(Cys8,17 disulfide bridge);
- 线性骨架环化,C 端游离羧基,无酰胺、焦谷氨酸、乙酰修饰;
- 无其他侧链定点标记。
- 结构式:
二、理化性质
1.紫外定量:含 Phe、Met、Tyr、Trp,280 nm 紫外吸收极强,可直接紫外分光光度法定量。
2.稳定性重点
- 双 Met 残基极易氧化;全程冰浴配液、减少空气接触;冻干粉长期保存必须充氮气隔氧;
- Trp、Tyr、Phe 均为强光敏残基,溶解、分装、储存全程避光;
- 二硫键维持稳定环型构象,N 端生物素封闭氨基端;但二硫键易被还原剂破坏,实验缓冲液避免含 DTT/β-ME;水溶液仍易被内肽酶降解,工作液现配现用。
3.酸碱特性
酸性残基:Asp;碱性残基:Arg;整体偏弱酸性;适配 pH 6.0–7.4 PBS、下丘脑神经元培养液、血浆模拟缓冲液,禁用高还原环境。
4.溶解性
Gln 亲水残基搭配大量带电酸碱氨基酸,水溶性良好,中性无还原剂缓冲液常温完全溶解。
5.空间构象
分子内二硫键形成特征环型核心结构,环区为 MCHR1/MCHR2 受体关键识别位点;N 端生物素位于环外侧,不干扰受体结合口袋与配体亲和力。
三、来源背景
黑色素浓缩激素 MCH 由下丘脑外侧区分泌,人、小鼠、大鼠成熟活性序列完全保守;N 端偶联生物素作为跨物种通用亲和探针,用于食欲、代谢相关受体互作实验。
四、生物学功能
- 高亲和力结合 MCHR1、MCHR2 受体,强效促进摄食、升高食欲;
- 调控机体能量代谢、脂肪蓄积、睡眠、情绪应激;
- 参与中枢奖赏通路、焦虑抑郁相关信号调控;
- 生物素标签可特异性结合链霉亲和素,Pull-down 富集 MCH 受体及互作蛋白,用于竞争结合、荧光示踪。
五、科研应用
- 人 / 啮齿类下丘脑细胞 Pull-down,捕获 MCHR1/MCHR2 受体及结合蛋白;
- MCH 受体拮抗剂 / 激动剂体外高通量筛选、竞争性结合实验;
- 肥胖、食欲紊乱、情绪相关体外细胞模型;
- 人 / 小鼠 / 大鼠 MCH 通路跨物种对比研究;
- 免疫荧光示踪 MCH 受体脑组织分布与受体内吞。
六、溶解与储存规范
- 溶解:pH7.2 无菌 PBS(无还原剂)冰浴避光配制,缩短敞口时间防 Met 氧化与二硫键断裂;
- 冻干粉:短期 - 20 ℃避光密封;长期分装充氮气隔氧,-80 ℃避光储存;严禁添加还原剂长期存放;
- 工作液:单次分装避免反复冻融;2~8 ℃避光存放不超过 3 天。
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