一、基础信息

  • 中文名称:N 端生物素修饰 P 物质
  • 英文名称:Biotinyl-Substance P
  • 完整序列标注:Biotin-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH₂
  • 单字母简写Bio-RPKPQQFFGLM-NH₂
  • 氨基酸数量:11 aa
  • 分子式:C63H98N18O13S
  • 分子量:1347.65
  • 结构修饰
  1. N 端共价连接生物素(Biotin / Bio / Biotinyl);
  2. C 端酰胺化(-NH₂);
  3. 无焦谷氨酸、二硫键、环化、乙酰修饰;侧链 Lys 游离氨基未修饰。
  • 结构式

二、理化性质

1.紫外定量:含双 Phe、Met,280 nm 有紫外吸收,可直接紫外分光光度法测浓度。

2.稳定性

  • 含 Met,极易氧化失活,配制、分装全程冰浴、减少空气接触;
  • Phe 为光敏残基,全程避光操作与保存;
  • C 端酰胺抵御羧肽酶降解,N 端生物素封闭氨基端,降低氨基肽酶切割;水溶液仍建议现配现用。

3.酸碱特性:碱性 Arg、Lys;中性 Gln,无酸性残基,整体弱碱性;pH 6.0–7.6 PBS、神经元培养液、血浆缓冲液稳定。

4.溶解性:Gln 亲水残基 + 碱性带电氨基酸,水溶性良好,中性缓冲液常温可完全溶解。

5.空间构象:多 Pro 形成局部刚性弯折,C 端 GLM 区段为 NK1 受体核心结合活性域;N 端生物素不影响受体结合能力,可用于亲和捕获。

三、来源背景

天然 P 物质(Substance P)N 端偶联生物素的探针肽,保留完整 NK 受体结合活性,依靠生物素 - 链霉亲和素(Streptavidin)互作实现 pull-down、荧光 / 酶标示踪。

四、生物学功能

  1. 高亲和力激动 NK1 神经激肽受体,介导疼痛传导、神经炎症、血管扩张;
  2. N 端生物素标签不干扰肽与受体结合,可作为亲和探针捕获细胞表面 NK1 受体、结合蛋白;
  3. 模拟内源 P 物质,诱导神经元钙信号、炎症因子释放。

五、科研应用

  1. 亲和 Pull-down:链霉亲和素树脂富集 P 物质相互作用蛋白;
  2. 细胞 / 组织荧光标记:示踪 NK1 受体分布、受体内吞;
  3. 疼痛、神经炎症体外细胞模型探针;
  4. 竞争性结合实验,筛选 NK1 受体拮抗剂;
  5. ELISA、原位杂交等生物素 - 亲和素放大检测体系。

六、溶解与储存规范

  1. 溶解:pH7.2 无菌 PBS 冰浴避光配制,尽量缩短敞口时间防止 Met 氧化;
  2. 冻干粉:短期 - 20 ℃避光密封;长期分装充氮气隔氧,-80 ℃避光储存;
  3. 工作液:单次分装避免反复冻融;2–8 ℃避光存放不超过 3 天。

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